Kako se s spektrofotometrom izračuna koncentracija DNK?
Kako se s spektrofotometrom izračuna koncentracija DNK?

Video: Kako se s spektrofotometrom izračuna koncentracija DNK?

Video: Kako se s spektrofotometrom izračuna koncentracija DNK?
Video: Грунтовка развод маркетологов? ТОП-10 вопросов о грунтовке. 2024, November
Anonim

Koncentracija DNK je ocenjeno po merjenje absorbance pri 260 nm, prilagajanje A260 meritev motnosti ( merjeno po absorbanca pri 320 nm), množenje od faktor redčenja in z uporabo razmerje, ki ga je A260 1,0 = 50 µg/ml čiste dsDNA.

Ljudje se tudi sprašujejo, kako najdete koncentracijo in čistost DNK?

Za oceno Čistost DNK , merite absorbanco od 230 nm do 320 nm, da zaznate druge možne onesnaževalce. Najpogostejši izračun čistosti je razmerje absorbance pri 260 nm, deljeno z odčitkom pri 280 nm. Dobra kakovost DNK bo imel A260/A280 razmerje 1,7–2,0.

Podobno, kaj je dobra koncentracija DNK? A dobro kakovost DNK vzorec mora imeti A260/A280 razmerje 1,7-2,0 in A260/A230 razmerje večje od 1,5, a ker se občutljivost različnih tehnik na te kontaminante razlikuje, je treba te vrednosti jemati le kot vodilo za čistost vašega vzorca.

V zvezi s tem, kako NanoDrop izračuna koncentracijo DNK?

Vrednost absorbance pri 260 nm pomnožite s fiksnim faktorjem (to je 50 za DNK ) in dobite Koncentracija DNK . Voilá. (V redu, to je tehnično A260 10 mm debelega vzorca, ki je pomnožen s 50; NanoDrop izraža A260, kot da bi bil vzorec debel 10 mm, kot v standardni kiveti).

Zakaj smo morali uporabiti spektrofotometer za kvantificiranje naše DNK?

A spektrofotometer je lahko določi povprečne koncentracije nukleinskih kislin DNK ali RNA, ki je prisotna v zmesi, kot tudi njihova čistost. Uporaba Beer-Lambertov zakon it je mogoče povezati količino absorbirane svetlobe s koncentracijo absorbirajoče molekule.

Priporočena: