Koliko stane preoblikovanje ligacije?

2024 Avtor: Miles Stephen | [email protected]. Nazadnje spremenjeno: 2023-12-15 23:40

Transformacija . Dodajte med 1-5 µl ligacija mešanico pristojnim celicam za preobrazbo . Razširjeno ligacija s PEG povzroči padec v preobrazbo učinkovitost (hitro Ligacija komplet). Elektroporacija je priporočljiva za velike konstrukcije (>10 000 bp).

Od tega, koliko ligacijskega produkta potrebujem za transformacijo?

Transformacija . Dodajte med 1-5 µl ligacija mešanico pristojnim celicam za preobrazbo . Razširjeno ligacija s PEG povzroči padec v preobrazbo učinkovitost (hitro Ligacija komplet). Elektroporacija je priporočljiva za velike konstrukcije (>10 000 bp).

Kasneje se postavlja vprašanje, kaj je ligacija in transformacija? V tipičnem poskusu kloniranja raziskovalci najprej vstavijo del DNK, kot je gen, v krožni del DNK, imenovan plazmid. Ta korak uporablja restrikcijske encime in DNA ligazo in se imenuje a ligacija . Po a ligacija , naslednji korak je prenos DNK v bakterije v procesu, imenovanem preobrazbo.

Pozneje se lahko vprašamo, koliko DNK je potrebno za ligacijo?

Celotna koncentracija vektor + vložek mora biti med 1-10 Μg/ml za učinkovito ligacija . Vektor: Priporočena so molarna razmerja vstavitve med 1:1 in 1:10 (tipično je 1:3). Če niste prepričani v svoje DNK koncentracije, izvajajo več ligacije z različnimi razmerji.

Kako dolgo lahko hranite ligacijsko reakcijo?

Ligacije lahko opravite pri sobni temperaturi ali na hladnejšem (mislim 12-16°C) čez noč ali celo nekaj dni, če ti res sem zaposlen. Ti lahko tudi shraniti ligacijo v hladilniku in ga kasneje vzamemo ven, da nadaljujemo z ligiranjem pri sobni temperaturi za as dolga po potrebi.